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感受态细胞的转化

2020-08-05 来源:帮我找美食网


TOP10感受态细胞的转化

1. 将制备好的TOP10感受态细胞于-80 ℃拿出后放置于冰盒中,并将将要转入的质粒同时放入冰盒中冷却待用。Usually around 30 min。

2. 将1μL质粒加入到100 μL感受态细胞中(迅速轻敲管底,以使质粒与细胞混合均匀)。

3. 在冰盒中静置30 min。

4. 42℃热激45 s——2 min。Put tubes on ice 2 min

5. 加入400 μL LB(或其它培养基亦可,最好为SOC,其成分有助于细胞恢复)。

6. 在37℃摇床中培养1h。

7. 吸取50 μL培养液涂板,37 ℃培养12 h。理论上铺满一个板需要80 μL菌液。如为连接产物进行转化则可以全部用于铺板。可以一个板反复铺直至铺满或分别铺至几个板中。

备注:质粒在用之前离心,防止其粘附于管口、管壁。

感受态在热激之前不可用手或室温融化,应放置于冰盒中让其自然融化。

质粒与细胞混匀时间不可过长,防止转化效率过低。

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