货号：MS1802 规格：100管/96样
谷氨酰胺酶(glutaminase, GLS) 活性测定试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GLS（EC 3.5.1.2） 存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
测定原理：
GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。
自备实验用品及仪器：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体60 mL×2 瓶，4 ℃保存； 试剂二：液体40 mL×1 瓶，4 ℃保存； 试剂三：液体60 mL×1 瓶，常温保存； 试剂四：液体5 mL×1 瓶，常温保存； 试剂五：液体3 mL×1 瓶，常温保存； 试剂六：液体3 mL×1瓶，常温避光保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104
个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。 2、样品测定（在EP管中加入下列试剂）： 试剂名称（uL） 测定管 对照管 样本 25 蒸馏水 25 试剂一 100 100 试剂二 400 400 混匀，37℃水浴 1 小时 试剂三 525 525 第1页，共3页
混匀，8000 g，25℃离心 10 min；取上清液，在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂 上清液 130 130 试剂四 30 30 试剂五 20 20 试剂六 20 20 混匀，420nm 处读取测定管和对照管吸光值，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做 一管。
酶活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1、血清（浆）GLS 活性
单位定义：每mL血清（浆）每小时催化谷氨酰胺生成1μmol氨定义为一个酶活力单位。 GLS（μmol /h/mL）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷T=363.1×(ΔA -0.1301) 2、组织、细菌或细胞 GLS 活性 （1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成1μmol氨定义为一个酶活力单位。
GLS（μmol/h/mg prot）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr÷T=363.1×(ΔA -0.1301)÷Cpr。 （2）按样本鲜重计算：
单位定义：每g组织每小时催化谷氨酰胺生成1μmol氨定义为一个酶活力单位。 GLS（μmol/h/g 鲜重）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(W÷V样总)÷T
=363.1×(ΔA-0.1301)÷W。
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细菌或细胞每小时催化谷氨酰胺生成1μmol氨定义为一个酶活力单位。 GLS（μmol/h/104cell）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(500÷V 样总)÷T
=0.7262×(ΔA -0.1301)
V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。 b.用96孔板测定的计算公式如下 1、血清（浆）GLS 活性
单位定义：每mL血清（浆）每小时催化谷氨酰胺生成1μmol氨定义为一个酶活力单位。 GLS（μmol/h/mL）＝726.2×(ΔA-0.1301)÷T=726.2×(ΔA-0.1301) 2、组织、细菌或细胞 GLS 活性 （1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成1μmol氨定义为一个酶活力单位。
GLS（μmol/h /mg prot）＝726.2×(ΔA-0.1301)÷Cpr÷T=726.2×(ΔA -0.1301)÷Cpr。 （2）按样本鲜重计算：
单位定义：每g组织每小时催化谷氨酰胺生成1μmol氨定义为一个酶活力单位。 GLS（μmol /h /g 鲜重）＝726.2×(ΔA-0.1301)÷(W÷V 样总) ÷T
=726.2×(ΔA -0.1301)÷W。
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细菌或细胞每小时催化谷氨酰胺生成1μmol氨定义为一个酶活力单位。 GLS（μmol/h/104cell）＝726.2×(ΔA-0.1301)÷(500÷V样总)÷T
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=1.4524×(ΔA -0.1301)
V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W： 样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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