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结核分枝杆菌异烟肼依赖性的初步调查

2024-03-30 来源:帮我找美食网
󰀁解放军医学杂志2007年4月第32卷第4期MedJChinPLAVol32No4April2007󰀁

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结核分枝杆菌异烟肼依赖性的初步调查

董梅󰀁孟祥红󰀁匡铁吉󰀁雷红󰀁何菊芳󰀁佟爱华

󰀂摘要 󰀁目的󰀁调查临床结核菌分离株对异烟肼的依赖状况。方法󰀁采用匡氏琼脂培养基分离痰结核菌并进行结核菌药敏试验,采用匡氏双向琼脂培养基检测结核菌药物依赖性。结果󰀁184例临床分离结核菌株异烟肼依赖包括4种类型。A型:含药管结核菌的生长较对照管明显粗大旺盛,且高浓度管菌落生长优于低浓度管者占6󰀁52%(12/184);B型:含药管结核菌的生长较对照管明显粗大旺盛,且低浓度管菌落生长优于高浓度管者占5󰀁43%(10/184);C型:低浓度管结核菌的生长较对照管明显粗大旺盛,而高浓度管菌落生长劣于对照管者占8󰀁15%(15/184);D型:高浓度管结核菌的生长较对照管明显粗大旺盛,而低浓度管菌落生长劣于对照管者占2󰀁17%(4/184)。统计结果显示具有异烟肼依赖特征的临床分离株占全部菌株的22󰀁28%(41/184)。结论󰀁结核菌临床分离株中存在异烟肼依赖株,并显示出不同的依赖特征。󰀁󰀁󰀂关键词 󰀁分枝杆菌,结核;赖药菌;异烟肼󰀁󰀁󰀂中国图书资料分类号 󰀁R378󰀁911

Initialinvestigationontheisoniazid󰀂dependenceofM.tuberculosis

DongMei,MengXianghong,KuangTieji,etal󰀁ClinicalLaboratory,SecondAffiliatedHospital,GeneralHos󰀂pitalofPLA,Beijing100091,China

󰀂Abstract 󰀁Objective󰀁Toinvestigatetheisoniazid󰀂dependenceofclinicalisolatedstrainsofM.tuberculosis.Methods󰀁Thedouble󰀂phaseKuang!sagarmediumwasemployedtoisolateM.tuberculosisfromthepatient!ssputum,anditsdrug󰀂resistanceanddrug󰀂depend󰀂enceweredetermined.Results󰀁184clinicalisolatesofisoniazid󰀂dependentM.tuberculosisweregroupedasfollows.TypeA:thestrainsgrewfasterandmorevigorousindrugtubesthanincontroltubes,andtherewere12strains(6󰀁5%)whichgrewmorecoloniesinhighconcentrationtubesthaninlowconcentrationtubes;TypeB:thestrainsgrewfasterandmorevigorousindrugtubesthanincontroltubes,andtherewere10strains(5󰀁4%)whichgrewmorecoloniesinlowconcentrationtubesthaninhighconcentrationtubes;TypeC:thestrainsgrewfasterandmorevigorousinlowconcentrationtubesthanincontroltubes,andtherewere15strains(8󰀁15%)whichgrewlesscoloniesinhighconcentrationtubesthanincontroltubes;TypeD:thestrainsgrewfasterandmorevigorousinhighconcentrationtubesthanincontroltubes,andtherewere4strains(2󰀁2%)whichgrewlesscoloniesinlowconcentrationtubesthanincontroltubes.Theiso󰀂niazid󰀂dependentstrainscovered22󰀁3%(41/184)ofthetotalclinicalisolates.Conclusion󰀁Theisoniazid󰀂dependentstrainsdidexistintheclinicalisolatesofM.tuberculosis,anddifferentfeaturesofdependencehavebeendetected.󰀁󰀁󰀂Keywords 󰀁Mycobacteriumtuberculosis;drug󰀂dependencebacteria;isoniazid

󰀁󰀁结核病至今仍是一个严重的世界性公共卫生问题,近十几年来结核病疫情呈现回升趋势。我国结核病患病人数居世界第2位,原发耐药和继发耐药率高,

[1][2]

且耐多药结核病占有很高比例。2000年,钟敏等报道约17󰀁7%的临床分离株对利福平呈现依赖性。异烟肼用于临床治疗结核病的时间最长,并凭借其高效杀菌且廉价的特点成为治疗结核病最重要的首选药物之一。因此,研究临床分离结核菌对异烟肼是否存在依赖性,以及这种依赖性有何特征,对结核病的防治及临床用药有重要的指导意义。本文对结核菌异烟肼依赖性进行了调查,现报道如下。1󰀁材料与方法

1󰀁1󰀁实验菌株󰀁184株临床分离结核菌均来自1998年1月~2001年12月在解放军总医院第二附属医院结核中心住院的肺结核患者。肺结核诊断标准:肺部有典型结核病变;痰抗酸杆菌阳性。1󰀁2󰀁质控菌株和原药粉󰀁以标准菌株H37RV作为质控菌株。异烟肼购自天津金耀氨基酸有限公司,批号0404161。1󰀁3󰀁结核分枝杆菌的培养和耐药性检测

1󰀁3󰀁1󰀁结核分枝杆菌的分离培养󰀁采用匡氏琼脂培养基分离培养,匡氏琼脂培养基的制备见相关文献报[3]

道。痰标本用20g/LNaOH液化,作用20min,分别取0󰀁2ml接种于斜面上,置36∀温箱内培养,每周观察菌落生长情况。1󰀁3󰀁2󰀁结核分枝杆菌药敏试验󰀁采用匡氏琼脂培养基间接药敏试验方法。异烟肼浓度分别为0󰀁5󰀁g/ml和5󰀁g/ml。刮取约10mg(按比浊法定量)斜面生长的结核菌,用蒸馏水稀释至0󰀁01mg/ml,各取0󰀁1ml接种于含药(H管)和对照斜面培养基,置于36∀温箱培养。1󰀁3󰀁3󰀁药物依赖性测定󰀁采用匡氏双向琼脂培养基,异烟肼浓度与药敏试验相同。痰标本采用20g/LNaOH溶液处理20min去污,加3倍pH6󰀁8磷酸盐缓冲液混匀后,4500r/min离心10min,去上清。沉淀用

󰀂作者简介 󰀁董梅,医学学士,主任医师。主要从事呼吸道病原菌的临床和生物化学研究。已发表论文30余篇,获军队科技进步三等奖3项󰀂作者单位 󰀁100091󰀁北京󰀁解放军总医院第二附属医院检验科(董梅、孟祥红、匡铁吉、雷红、何菊芳、佟爱华)

󰀂基金项目 󰀁国家自然科学基金资助项目(30571403)#336#

󰀁解放军医学杂志2007年4月第32卷第4期MedJChinPLAVol32No4April2007󰀁

pH7󰀁0磷酸盐缓冲液洗2次。加入1~5ml无菌蒸馏水,混匀后接种。1󰀁3󰀁4󰀁药物依赖性的判定󰀁在含药培养基中结核分枝杆菌菌落生长较对照管快,菌落初生长时间较对照管早1周以上,菌落数较对照管多,菌落生长旺盛、形态典型、菌落大,且菌体粗大。2󰀁结󰀁果

184株临床分离结核菌株异烟肼依赖性检测结果表明,结核菌药物依赖类型有以下4种。A型:结核菌在含药管生长较对照管明显粗大旺盛,且高浓度管菌落生长优于低浓度管,共12株(6󰀁52%);B型:结核菌在含药管生长较对照管明显粗大旺盛,且低浓度管菌落生长优于高浓度管,共10株(5󰀁43%);C型:结核菌在低浓度管生长较对照管明显粗大旺盛,高浓度管菌落生长劣于对照管,共15株(8󰀁15%);D型:结核菌在高浓度管生长较对照管明显粗大旺盛,低浓度管生长劣于对照管,共4株(2󰀁17%)。41株(22󰀁28%)异烟肼依赖菌均分离自复治结核病患者或难治结核病患者。

异烟肼A型依赖株在低浓度含药斜面或高浓度含药斜面上的菌落数高于对照斜面,其中在低浓度含药斜面和高浓度含药斜面均显著高于对照斜面的有7株(表1)。异烟肼B型依赖株在低浓度和高浓度含药斜面上的菌落数均高于对照斜面。所试异烟肼依赖结核菌株均为异烟肼耐药株。除2株C型依赖株对异烟肼低度耐药外,其余异烟肼依赖株均对异烟肼高度耐药。

表1󰀁12株A型异烟肼依赖株药敏试验结果

Table1󰀁Detectionforresistancetoisoniazidin12dug󰀂dependingstrainsofpatternA

编号17915448448636414566455

468502561

对照管3+3+3+2+2+3+3+3+2+3+1+3+

H管(󰀁g/ml)0󰀁54+4+3+2+2+4+4+4+3+4+3+3+

5󰀁04+4+4+3+3+4+4+3+3+4+3+3+

一,异烟肼高耐药结核菌株的产生,尤其是其药物依赖现象的发现成为结核病治疗和预防的新课题。目前普遍认为异烟肼耐药作用主要是由于KatG基因发生改变所致。KatG基因表达的过氧化物酶在细胞内将异烟肼氧化成异烟酸,成为尼克酸类似物,参与辅酶%NAD的合成,使其不能起同工酶的作用,而抑制细胞壁分枝菌酸的生物合成,使保护分枝杆菌的屏障受到损害。KatG基因突变会导致耐异烟肼结核菌出[4-5]现。

本实验结果显示:临床结核菌株对异烟肼出现了低浓度依赖现象(低浓度管生长好于对照管而高浓度管生长差于对照管)和高浓度依赖现象(高浓度管生长好于对照管而低浓度管生长差于对照管),国内外未见报道。本研究结果说明,接受标准化疗的结核病患者,其血液异烟肼水平恰处在高浓度依赖值和低浓度依赖值范围内。结核菌对异烟肼依赖性呈现多种类型的机制尚不清楚,但超低浓度和低浓度依赖性的存在,一方面提示结核菌药物依赖性的产生可能起源于一种渐进模式,同时也提示结核菌的药物依赖性可能与耐药结核菌群的产生和形成有着密切关系。另外,结核杆菌对异烟肼的依赖现象为相对依赖,即异烟肼依赖菌对异烟肼的依赖性只限于某个浓度范围,提示高浓度的异烟肼对依赖低浓度异烟肼的结核杆菌可能仍然具有杀菌效果,这一现象值得继续深入研究。

本研究发现,有22󰀁28%的结核菌临床分离株依赖异烟肼,而所有这些依赖菌株均是从复治和难治病例痰标本中分离得到的。这提示结核菌异烟肼依赖性的产生可能导致结核病化疗无效或疗效降低。如何预防结核菌获得药物依赖性是临床和实验室须高度关注和尽快解决的课题。

󰀂参考文献

[1][2][3][4][5]

匡铁吉,董梅,宋萍,等󰀁结核杆菌单药敏感试验与多药联合敏感试验比较研究󰀁解放军医学杂志,2002,27(1):104

钟敏,娄乐山,温渤海,等󰀁分枝杆菌依赖利福平的实验观察󰀁中华结核和呼吸杂志,2000,23(2):104

匡铁吉,董梅,雷红,等󰀁匡氏琼脂培养基用于痰结核菌直接药敏试验的效果研究󰀁中国检验医学与临床,2002,3(2):54

胡忠义,靳安佳,景凤香,等󰀁结核杆菌耐药基因检测󰀁中华检验医学杂志,2001,24(2):73

程晓东,于文斌,别良峰,等󰀁多重聚合酶链反应󰀂单链构象多态性分析检测耐异烟肼结核分枝杆菌󰀁中华结核和呼吸杂志,2004,27(1):23

(2006󰀂08󰀂16收稿󰀁2007󰀂03󰀂01修回)

󰀁󰀁注:1+󰀁斜面菌落数<10个;2+󰀁斜面菌落数10~50个;3+󰀁斜面菌落数51~200个;4+󰀁斜面菌落数∃200个

(责任编辑󰀁张青山)

3󰀁讨󰀁论

异烟肼是目前结核病初治化疗方案的主要药物之

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