辣椒炭疽病病原鉴定及其杀菌剂毒力测定

吴小毛樊 荣王坤英李继业1(1.贵州大学农学院，贵阳550025； 2.贵州大学烟草学院，贵阳550025)摘要从贵阳市花溪区磊庄村辣椒基地采集疑似炭疽病的典型的自然发病辣椒果实，采用组织分离、培养、形态学 观察、致病性测定以及多基因分子系统学，确定病原菌的种类；采用菌丝生长速率法研究了 8种杀菌剂对该病菌菌 丝生长的抑制作用\"结果表明，引起贵阳市花溪区磊庄村辣椒炭疽病的病原菌为尖抱炭疽菌Capsicum acutatum „

室內毒力测定发现8种杀菌剂对尖抱炭疽菌均有一定的抑制作用，其中25%咪鲜胺EC和30%吡唑醚菌酯SC抑 制效果最好,EC分别为0. 253 5 mg/L和0. 720 3 mg/L；其次为22. 5%啶氧菌酯SC和22. 7%二氰蒽醌SC,EC50

。分别为7. 249 5 mg/L和21. 664 5 mg/L。将30%吡唑醚菌酯SC和22. 7%二氰蒽醌SC按照9： 1、6： 4、3： 7、4： 6的

比例混配，联合毒力测定和评价结果显示两者混配对该病菌具有协同增效作用，且25%咪鲜胺EC和22. 5%啶氧

菌酯SC以6：4、4：6、8：2的比例进行混配时也表现出明显的增效作用。引起贵阳市花溪区磊庄村辣椒基地辣椒炭

疽病的致病菌为尖抱炭疽菌。咪鲜胺、吡唑醚菌酯、啶氧菌酯和二氰蒽醌对该菌具有较好的抑制作用，可为辣椒炭 疽病的田间防治提供参考依据。关键词 辣椒炭疽病；病原鉴定；多基因分子系统学；尖抱炭疽菌；联合毒力测定 中图分类号：S 432. 4

文献标识码：A DOI： 10.16688/j.zwbh. 2018341Identification of the pathogen and toxicity test of fungicides to

capsicum anthracnoseWANG Ni1, YIN Xianhui1, PENG Lijuan2, LI Rongyu1, LONG Youhua1,WU Xiaomao1, FAN Rong , WANG Kunying , LI Jiye1(1. College of Agriculture, Guizhou University, Guiyang 550025, China ；2. College of Tobacco Science, Guizhou University, Guiyang 550025, China')Abstract In order to identify the species of the pathogen and screen out the chemicals with strong inhibitoryeffect, the typical natural chiii fruits with suspected anthracnose were collected from the capsicum base of Le-

izhuang village in Huaxi district of Guiyang city. The sampled capsicum fruits were isolated and cultured. The

pathogen was identified by morphological observation, pathogenicity determination and multi-gene (ITS, ACT, TUB2, CHS-1, GAPDH, HIS3) phylogeny analysis , and the inhibitory effect of 8 fungicides was investigated by

themethodo;mycelialgrowthrate.Theresultsshowedthatthepathogencausingcapsicumanthracnosewas C. acutatum. Indoor toxicity test showed that 8 fungicides had a certain inhibitory effect on capsicum anthracnose.

The inhibition effect of prochloraz 25% EC and pyraclostrobin 30% SC was higher with the EC50 values of 0.253 5 mg/L and 0. 720 3 mg/L , respectively , followed by picoxystrobin 22. 5% SC and dithianon 22. 7% SC , with the

EC50 values of 7.249 5 mg/L and 21. 664 5 mg/L , respectively. Pyraclostrobin 30% SC and dithianon 22.7% SC

atthemixtureratioof9：1 6：4 3：7and4：6showedobvioussynergisticeffect.Prochlorazandpicoxystrobinmixed

attheratioof6：4 4：6 8：2alsoshowedobvioussynergisticefect.Prochloraz pyraclostrobin picoxystrobinand dithianonhavegoodinhibitioneffectonthepathogen whichcanprovidetheoreticalreferencefortheprevention

andcontrolofcapsicumanthracnose.Key words capsicum anthracnose； pathogen identification； multi-gene phylogeny； Colletotrichum acutatum ；co-toxicitydetermination收稿日期：2018-08 -01 修订日期：2018-10-15基金项目：国家重点研发计划(2018YFD0201210-2)& 通信作者 E-mail： xhyin@gzu. edu. cn.45 卷第4 期王妮等:辣椒炭疽病病原鉴定及其杀菌剂毒力测定• 217 •辣椒炭疽病是辣椒上的一种普遍发生的真菌性 病害。引起辣椒炭疽病的病原菌种类较多，属于类别

复杂、种类繁多的半知菌亚门炭疽菌属Colletotr--

c1材料与方法1.1试验材料供试菌株:从贵阳市花溪区湖潮乡磊庄村的辣 椒基地采集疑似炭疽病的典型的自然发病的辣椒果

hum,被列为世界上重要的植物病原真菌群病原

菌可危害辣椒果实、叶片和茎部，严重影响辣椒的品

质和产量。近年,随着贵州省农业产业结构调整助推 实，带回实验室进行组织分离、培养*培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):马铃

薯 200. 00 g、葡萄糖 20. 00 g、琼脂 15. 00〜20. 00 g、蒸

脱贫攻坚的大力开展，辣椒种植面积不断扩大，在高

温高湿的气候条件下，辣椒炭疽病的危害程度也在逐 年加剧23)。在国内研究报道中，辣椒炭疽病主要危 馏水1L,pH为7.0* 121C灭菌40 min，用于辣椒炭 害叶片与果实，引起落叶及采前、采后的果实腐烂等

症状，病害发生较重时病果率达20%〜30%,造成极

为严重的经济损失4 *周传波等5于2001年在海南

省澄迈县白连镇辣椒产区调查中发现胶抱炭疽病菌 C. gloeosporioides引起的辣椒炭疽病占调查病果的

92%，而在澄迈县永发镇辣椒产区中发现由黑色炭疽 病菌C. mgrum所引致的辣椒炭疽病，则占调查病果

的87%,可见不同致病菌引起的炭疽病均可对辣椒果

实造成严重的损失*李小霞和肖仲久6于2011年在 贵阳市花溪区磊庄村辣椒基地中发现，引起该地区

辣椒炭疽病的主要病菌是黑色炭疽菌C. nigrum*在国外的研究报道中，炭疽病菌感染辣椒最早在 印度发现，引起辣椒炭疽病的真菌主要有4种:辣椒

炭疽菌C. capsOi、胶抱炭疽菌C. gloeosporioides-^尖抱

炭疽菌C. acutatum和黑色炭疽菌C. nigrim^799 *这

4种炭疽菌在中国、印度、越南、巴西、泰国和韩国等 国家的辣椒生产中均有发生，其中胶抱炭疽菌和辣

椒炭疽菌的侵染发生普遍，黑色炭疽病仅部分地区

发生，而最近几年尖抱炭疽菌的危害逐年加重口09 *目前，化学防治仍是防治辣椒炭疽病的关键技

术措施。传统药剂如多菌灵、甲基硫菌灵、代森锰锌 等对辣椒炭疽病的防治效果不很理想，并且长期使

用容易导致病菌对其产生抗药性，因此不建议用于 该病害的田间防治(119*甲氧基丙烯酸酯类如醚菌

酯、肟菌酯等在防治辣椒炭疽病上被广泛使用，但其

对病原菌作用位点单一，容易导致病原菌产生抗药 性口29 *本研究通过对辣椒炭疽病菌进行形态学观

察、致病力测定和多基因联合分析，确定致病菌种 类，并通过测定8种杀菌剂及其混配药剂对辣椒炭 疽病菌的联合毒力作用，筛选出对该病菌具有强烈 抑制作用的化学药剂，以期控制辣椒炭疽病的发生

和流行，为辣椒炭疽病的防治提供理论参考依据，从 而进一步满足生产需要*疽病的分离、纯化及培养*供试药剂：20%噁霉•乙蒜素可湿性粉剂

(WP),河南省南阳卧龙农药厂;30%毗唑醚菌酯悬 浮剂(SC),青岛星牌作物科学有限公司;25 %咪鲜胺

乳油(EC),重庆双丰化工有限公司；22. 5%啶氧菌酯 悬浮剂(SC),美国杜邦公司;50%多菌灵•代森锰锌

可湿性粉剂(WP),山东省潍坊海宇生物化学农药公

司#2.7 %二氧蔥醌悬浮剂(SC),江西禾益化工股份 有限公司；40%百菌清悬浮剂(SC),日本史迪士生

物科学株式会社；27%春雷•漠菌腈可湿性粉剂

(WP),陕西汤普森生物科技有限公司*1. 2试验方法1.2.1病原菌的组织分离用75%乙醇擦拭辣椒果实表面,杀死果实表面

的杂菌，用消毒的剪刀在辣椒果实病健交界处切取 大小为2 mm2的组织，采用常规组织分离法分离培 养(139*挑取具有典型真菌菌落特征的单菌落分离

纯化，采用斜面保存法对纯化后的目标菌株编号并

于4°C冰箱中保存备用*1.2.2病原菌致病力测定根据柯赫氏法则进行回接试验，测定分离菌

株的致病力*参考高杨杨等口49的方法，并做改

进*采用针刺接种法和直接涂抹法在辣椒果实上

接种*接种后将辣椒置于含滤纸和脱脂棉的保鲜

盒(34 cmX 27 cmX 10 cm)中保湿培养24 h,滤纸

和脱脂棉用灭菌的去离子水浸湿，辣椒果蒂用润湿

的脱脂棉包裹保湿,控制培养的湿度条件，每隔1〜

2 d观察症状*1.2.3病原菌形态学鉴定选取具有致病性、且接种辣椒果实后有典型发

病特征的菌株，用镊子挑取病原菌的分生抱子制片,

在光学显微镜下观察分生抱子的形态特征并拍照*

观察PDA平板上该病原菌菌落的形态、大小、颜色

• 218 •等特征。1.2.4病原菌分子鉴定采用Biomiga公司的真菌基因组DNA提取试

2019药剂筛选。将各供试药剂用无菌水配制成10倍于

试验所需浓度的母液，然后以体积比1：9分别加至

冷却至45°C的PDA培养基中，充分摇匀后制成含 药平板。用打孔器(d=0. 50 cm)在供试菌株菌落

剂盒提取DNA。分别对病原菌的核糖体转录间隔

区序列(internal transcribed spaces, ITS)、肌动蛋

边缘处打取菌饼，用接种针挑取菌饼接种在PDA

平板的中央，以无菌水作对照，设5个浓度，3次重

白基因(actin gene, ACT)、-微管蛋白基因(/-tubu­lin gene,TUB 2)、几丁质合成酶 A 基因(chitin syn­thase A gene,CHS1)、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因

复。接种后置于28°C恒温箱中倒置培养7d,待对

照组菌饼长至整个平板的三分之二时，用十字交叉

(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenasegene%

GAPDH)和组蛋白基因(histone 3,-HIS 3)进行 PCR扩增。PCR反应体系总体积为50 #L，包括

法测量供试菌株在不同浓度药剂平板上的菌落直

径(cm),按照如下公式计算供试药剂在不同浓度

下的菌丝生长抑制率。菌丝生长抑制率=(对照菌落直径一处理菌落

DNA模板2#L,正反向引物各2#L,2XMasterMix

25 #L,以ddH2O补足至50 #L*反应程序为：94°C

直径)/(对照菌落直径一菌饼直径)X100% *预变性5 min；94°C变性30 s,按各引物相应的退火

温度退火45 s(表1),72°C延伸1 min,共30个循 环(5)。PCR扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳检

混剂毒力测定:采用交互测定法进行配比筛选,

首先设置11个浓度梯度及对照测定各个单剂的 EC50 ;其次选择两种抑菌效果好的药剂EC50溶液以 不同的体积比进行复配，计算各组配比的毒效比

测,获得与预期大小一致的核苷酸片段后，送至生工

生物工程(上海)公司纯化和测序。(TR)\"] *根据毒效比选择有增效作用或相加作用的两种配

将获得的各个基因序列与GenBank中的序列

进行比对,下载同时含有ITS、ACT、TUB 2.CHS-1 + GAPDH和HIS 3基因的炭疽菌属模式菌株及其他菌

株序列作为参考序列(6)将目标菌株基因按照ITS

比进行混配*同样计算EC0，采用Sun和Johnson8的

方法计算共毒系数(CTC)*1.3数据分析ACT-TUB 2-CHS-1-GAPDH-HIS 3 的顺序首尾拼 接，用MEGA 7. 0软件的“W”功能比对并手工校正 后，选择邻接法(neighbor- oining, NJ )构建系统发育 树，以自展法(bootstrap)进行检测,共循环1 000次。

利用Office 2010对数据进行整理，结合DPS 7. 05

统计软件，以处理浓度(mg/L)的对数值为横坐标和

相应抑制几率值为纵坐标求出毒力回归方程(y = a十

b?)，并以回归方程计算各供试药剂对辣椒炭疽菌菌

丝生长的抑制中浓度(EG。)、置信区间及相关系数

(r),比较不同杀菌剂对辣椒炭疽病菌的抑制作用*1.2.5药剂室内毒力测定单剂毒力测定:采用菌丝生长速率法进行室内

表1扩增辣椒炭疽病病原菌不同序列所用的引物Table 1 Primers for amplification of different sequences of Colletotrichum sp.基因Gene退火温度/°CAnnealingtemperature引物PrimernameITS1ITS4引物序列(5，-3,)Primer sequenceITS5558TCCGTAGGTGAACCTGCGGTCCTCCGCTTATTGATATGCACTTUB2ACT-512FACT-783RATGTGCAAGGCCGGTTTCGCTACGAGTCCTTCTGGCCCATAACATGCGTGAGATTGTAAGTACCCTCAGTGTAGTGACCCTTGGCTGGGGCAAGGATGCTTGGAAGAAGTGGAAGAACCATCTGTGAGAGTTG59595955TI2bCHS-79FCHS-354RGDFGDRCHS-1GAPDHHIS3GCCGTCAACGACCCCTTCATTGAGGGTGGAGTCGTACTTGAGCATGTAGGTCCACTGGTGGCAAGAGCTGGATGTCCTTGGACTGCYLH3FCYLH3R45卷第4期王妮等:辣椒炭疽病病原鉴定及其杀菌剂毒力测定・219・2结果与分析2.1病原菌的形态学鉴定病原菌在PDA平板上的菌落呈圆形，开始生长

即为分生抱子团（图2b、图2d）。挑取橘黄色黏质物

进行重新组织分离％艮据柯赫氏法则,再次得到与接

种菌基本一致的病原菌菌株，证明该菌为辣椒炭疽

病的致病菌。较缓慢％ d后,菌落直径可达60 mm,边缘光滑且整

齐,菌丝茂盛,呈柔软绒状,菌落灰白色,贴附培养基

生长,后期逐渐变为灰褐色，反面有浅褐色的同心环

纹（图h、图lb\"显微镜下观察，分生抱子梭形，表面

光滑,无色,单胞，两端或一端尖，有的有油球，大小为 （7. 5〜11. 5）#mX （3. 5〜4.3） #m；附着胞褐色，卵

圆形或倒卵圆形，边缘规则或不规则，大小为（4.5〜5. 4）#mX （4. 1〜6. 5）#m（图lc） *参照真菌鉴定手 册以及植物病原真菌学（920）,初步将该菌株鉴定为

尖抱炭疽菌C. acutatum*图1辣椒炭疽病菌在PDA平板上的

菌落形态及分生孢子Fig. 1 Colonial morphology and conidia ofColletotrichum sp. on PDA plate2.2病原菌的致病力鉴定通过针刺接种法和直接涂抹法接种的辣椒果

实，分别表现出不同的特征*采用针刺接种法接种

的辣椒果实在第3天开始发病，病斑扩展速度快，到

第5天病斑直径可达15〜20mm（图2a） *直接涂

抹法接种的辣椒果实接种第5天开始发病,随后病

斑逐渐扩展倒第7天病斑直径可达10〜15 mm%旦与

针刺接种法相比%直接涂抹法接种的病斑扩展速度 较慢，且发病效果没有前者好（图2c）病斑症状也不

如前者明显，对照没有发病*接种后的辣椒果实病 斑呈椭圆形，向内凹陷、病斑局部呈黑褐色，且脆弱

单薄,水渍状，中央有很多橘黄色的黏性物质溢出，a:部产生的分生砲子团d: WoundThe arrow inoculation; show the b:conidia Non-wound produced inoculation; in the diseased c: Lesion area morphology; 图2辣椒炭疽病菌的致病性鉴定Fig.2 Pathogenicityofthepathogencausingthe

anthracnoseonpepper2.3病原菌的分子生物学鉴定从纯化后的病原菌中提取DNA进行PCR扩增,

用琼脂糖凝胶电泳对扩增出的ITS、ACT、TUB2、

CHS1、GAPDH、HIS3的核苷酸片段进行检测,分别得

到 558、250、759、291、248 和 387 bp 的片段（图 3）* 序列

测序后，与参考基因进行比对，系统发育树显示，病

原菌TJ0102与尖抱炭疽菌C. acutatum模式菌株

（CBS 292. 67）聚为一个进化支,并且支持率为98% （图4）结合病原菌形态特征和多基因系统发育树，鉴

定该辣椒炭疽病病原菌为尖抱炭疽菌C. acutatum*1 2 3 4 5 6 Mbp5 00032 0000001 000750500250100M:1:ITS; DNA 2: MarkerACT; 3: TUB2; 4: CHS-1; 5: GAPDH; 6: HIS3; 图3目标菌株TJ0102的PCR扩增产物电泳图谱Fig. 3 Electrophoresis results of PCR product of TJ0102・220・I。。---- Colletotrichum boninense CBS 123755100— Colletotrichum cymbidiicola IMI 347923Colletotrichum brassicicola CBS 101059H85Colletotrichum colombiense CBS 12981898100Colletotrichum annellatum CBS 129826------Colletotrichum novae-zelandiae CBS 12850543Colletotrichum brasiliense CBS 128501Colletotrichum constrictum CBS 128504Colletotrichum dacrycarpi CBS 1302411001--------- Colletotrichum gloeosporioides CBS 112999----Colletotrichum truncatum CBS 170.59Colletotrichum acutatum CBS 144.29TJ0102100AColletotrichum australe CBS 116478------Colletotrichum godetiae CBS 133.44Colletotrichum coccodes CBS 369.75Colletotrichum lilii CBS 109214--------------Colletotrichum circinans CBS 221.81Colletotrichum anthrisci CBS 125334一 Colletotrichum fructi CBS 346.372019100421009985991000.020图4基于ITS、ACT、TMB 2、CHS-1、GAPDH、HIS 3基因合并序列以NJ法构建的炭疽菌系统发育树Fig. 4 NJ phylogenic tree of Colletotrichum based on sequences of ITS, ACT,TUB 2,CHS-1,GAPDH and HIS 3 genes2.4供试药剂对辣椒炭疽病菌的室内毒力测定啶氧菌酯SCEC50为7. 249 5 mg/L,也表现出较好 的抑制效果*另外，50%多菌灵・代森锰锌WP,

2.4.1 8种杀菌剂毒力测定由表2可见％种杀菌剂对辣椒炭疽病菌均表

现出一定的抑制效果％旦对菌丝生长的抑制效果不

27%春雷・漠菌腈WP和22. 7%二氧蔥醌SC的

抑菌活性也较好,EC0分别为28. 347 2、28. 810 8和

21. 664 5 mg/L；而40%百菌清SC及20%噁霉・乙蒜

同，毒力差异较大*从药剂的EG°来看，25%咪鲜

胺EC与30%卩比唑醚菌酯SC的抑菌作用最强，其

素WP的抑菌效果一般，其EQ°分别为105. 397 3 mg/L

和 81. 601 2 mg/L*EG分别为 0. 253 5 和 0. 720 3 mg/L；其次是 22. 5%

表2 8种杀菌剂对辣椒炭疽病菌的室内毒力测定结果Table 2 Indoor toxicity test of eight fungicides to Colletotrichum acutatum杀菌剂Fungicide50%多菌灵•代森锰锌 WP carbendazim ・ mancozeb 50 % WP20%噁霉・乙蒜素 WP hymexazol ・ ethylicin 20% WP30%卩比唑醚菌酯 SC pyraclostrobin 30% SC25%咪鲜胺 EC prochloraz 25% EC22. 5%啶氧菌酯 SC picoxystrobin 22. 5% SC40%百菌清 SC chlorothalonil 40% SC27%春雷•溴菌月青 WP kasugamycin ・ bromothalonil 27% WP22. 7%二氧蔥醞 SC dithianon 22. 7% SC毒力回归方程Regressionequationoftoxicityy=3. 098 1 + 1. 309 4乂y=2. 146 5 + 1. 492 7?y=5.0574+0.4026?y=5. 660 9 + 1. 108 9?y=4.4363+0.6552?y=3. 001 3 + 0. 988 1?y=2.8473+1.4749?y=4. 136 2 + 0. 646 7?相关系数！）Corelationcoeficients0.98630.98380.96830.99960.97410.98680.98040.9970EC50/mg ・ L—128.347281.60120. 720 30. 253 57. 249 5105.397328.810821.66452.4.2混合药剂配比筛选者相加作用*当30%卩比唑醚菌酯SC和22. 7%二氧

30%卩比唑醚菌酯SC和22. 7%二氧蔥醌SC对 蔥醌SC配比为9：1、6：4和3： 7时，毒效比大于1且 大于两种药剂的其他配比*当两种药剂配比为4：6

辣椒炭疽病菌的毒性较高，且两种药剂作用机制不 一致，由表3可见，将30%卩比唑醚菌酯SC和22. 7%

和1 ： 9时，毒效比接近1，说明两种药剂以此配比进 行混配具有一定的相加作用*因此％艮据两种药剂

二氧蔥醌SC以不同比例进行混配，其毒效比大于1

或在1左右，说明两种药剂混配具有一定的增效或 毒效比的大小，可以选择配比为9：1、6：4、3：7、4：6

45卷第4期王妮等:辣椒炭疽病病原鉴定及其杀菌剂毒力测定• 221 •和1：9这5种配比来进行共毒系数及联合毒力的

测定。表3吡唑醚菌酯和二氰蒽醌不同配比对

辣椒炭疽病菌的毒性比率1Table3 Toxicityratioofpyraclostrobinanddithianonat表4咪鲜胺和啶氧菌酯不同配比对

辣椒炭疽病菌的毒性比率1$Table 4 Toxicity ratio of prochloraz and picoxystrobin atdiferentmixturer3tiotoColetotrichumacutatumEa：Ebdifferent mixture ratio to Colletotrichum acutatumEaEb10k09k18k27k36k45k54k63k72k81k90k10实际抑制率/%Actualinhibitionrate0. 730. 900. 650. 650. 970. 620. 830. 970. 750. 800. 94期望抑制率/% Expected inhibitionrate0. 500. 750. 810. 840. 860. 870. 880. 880. 860. 830. 50毒效比(TR)Toxicityratio1.461. 200. 810. 771.130. 710. 941.110. 870. 961. 8910k09k18k27k36k45k54k63k72k81k90k10实际抑制率/%Actualinhibitionrate0. 480. 410. 680. 590. 780. 800. 750. 740. 590. 480. 46期望抑制率/%

Expected inhibitionrate0. 500. 740. 780. 800. 800. 790. 770. 740. 690. 520. 50毒效比(TR)Toxicityratio0. 960. 550. 880. 700. 981. 010. 971. 000. 850. 780. 931\" EaEb表示咪鲜胺和啶氧菌酯的体积比*Ea：Eb represent the volume ratio of prochloraz and picoxystrobin.1\" EaEb表示毗唑醚菌酯和二氰蒽醌的体积比*Ea：Eb represent the volume ratio of pyraclostrobin and dithianon.2.4.3混剂共毒系数测定由表5可见，将30%毗唑醚菌酯SC和22. 7% 二氧蔥醞SC按照筛选出的配比进行混配并测定其

共毒系数及联合毒力，结果表明：配比组合为4：6、 6：4和91时，其ECm均较小，且明显小于两种单剂

22.5%啶氧菌酯SC和25%咪鲜胺EC作用机

理不同且没有交互抗性，可以选择这两种药剂进行

混配。由表4可见，将25%咪鲜胺EC和22.5%啶 氧菌酯SC以不同比例进行混配，其毒效比大于1或

的ECe ,配比组合为3：7时，其EC50明显小于两种单

剂中的某一种单剂，说明以这4种配比组合进行混

在1左右，说明两种药剂混配具有一定的增效或者

相加作用。因此,根据两种药剂毒效比的大小，可以

选择配比为5：5、3：7、6：4、4：6和8：2这5种配比来

配均对该辣椒炭疽病菌具有较强的抑制作用。4种 配比组合的共毒系数分别为231、661、542、857,其 CTC 大于120%表现出明显的增效作用%且4 种配比 组合中，91为最佳配比。进行共毒系数及联合毒力的测定。表5吡唑醚菌酯和二氰蒽醌复配对辣椒炭疽病菌的联合毒力作用1Table5 Co-/oxiciyof/hemixedpyraclos/robinanddihianon/oColetotrichum-cut-tumEaEb3 74 66 49 1毒力回归方程

Regression equation of toxicityy=5. 008 0 + 0. 490 0?y=5. 280 7+0. 490 0?y=5. 226 9+0. 341 6?y= 5. 375 0+0. 363 6?相关系数(r)Corelationcoeficient0.99040.92680.99440.9955ECso/mg • L—10.96530.25960.21670.0930共毒系数Co-toxicitycoeficient231661542857联合毒力Co-toxicity增效增效增效增效1\" EaEb表示毗唑醚菌酯和二氤恵醌的体积比*Ea：Eb represent the volume ratio of pyraclostrobin and dithianon.表6咪鲜胺和啶氧菌酯复配对辣椒炭疽病菌的联合毒力作用1Table 6 Co-toxicity of the mixed prochloraz and picoxystrobin to Colletotrichum acutatumEaEb6k42k84k6毒力回归方程Regression equation of toxicityy=5. 406 3 + 0. 550 0?y=5. 404 2+0. 548 9?y=5. 688 0+0. 641 7?相关系数(r)Corelationcoeficient0.94630.96310.9792EGo/mg • L—10.18250.18350.0847共毒系数Co-toxicitycoeficient226606711联合毒力Co-toxicity增效增效增效1\" Ea：Eb表示咪鲜胺和啶氧菌酯的体积比*Ea：Eb represent the volume ratio of prochloraz and picoxystrobin.• 222 •2019由表6可见，将25%咪鲜胺EC和22. 5%啶氧 菌酯SC按照筛选出的配比进行混配并测定其共毒

果与刘曦等囚用咪鲜胺处理辣椒炭疽病菌和林琳 等9）用毗唑醚菌酯处理辣椒黑色炭疽菌和胶抱炭

（系数及联合毒力，结果表明:配比组合为6：4、2：8和 疽菌的毒力测定结果基本一致，即25%咪鲜胺EC 和30%毗唑醚菌酯SC均表现出较强的抑制作用，

4： 6时，其EC50均较小，且明显小于两种单剂的 EC50，说明以这3种配比组合进行混配对辣椒炭疽

病菌具有较强的抑制作用。3种配比组合的共毒系

EC。分别为 0.144 5 和 0. 481 8 mg/L；其次是 22. 5% 啶氧菌酯SCEC50为7. 249 5 mg/L,与任璐等（0）

数分别为226606+11，其CTC大于120,表现出明

显的增效作用。在研究辣椒炭疽病对啶氧菌酯敏感性的测定中得

出的结论相似。另外,50%多菌灵•代森锰锌WP,

27%春雷•漠菌青WP和22. 7%二氧蔥醌SC的抑 3讨论本研究对采自贵阳市花溪区磊庄村的疑似辣椒

炭疽病的果实进行病原菌的分离纯化和柯赫氏法则

验证，确定分离菌株为辣椒炭疽病的病原菌。通过 对病原菌的形态观察，发现其与尖抱炭疽菌Colle­

totrichum acutatum形态特征基本一致。由于炭疽 菌属形态学特征可变性强，培养形状不稳定,容易受

到环境的影响：21］，以形态学或单基因序列作为唯一 的分类标准其鉴定结果具有不确定性。虽然ITS序 列为多数物种的鉴定提供了有力工具%但对炭疽菌

属真菌系统发育树构建的支持率较低，具有一定的

局限性（2）。因此，我们采用多基因系统发育分析法

对病原菌的 ITS、ACT、TUB 2,CHS-1,GAPDH 和 HIS 3基因进行联合分析,系统发育树结果显示，病

原菌与尖抱炭疽菌C. acutatum模式菌株（CBS 292.67）聚为一个进化支，支持率为98%。其他分

支中，同种菌株间也以非常高的支持率聚在一起，比

单基因序列更能准确地鉴定炭疽菌的种类阴。辣

椒炭疽病由多种致病菌引起，由尖抱炭疽菌引起的

辣椒炭疽病在山东口4）、重庆宙、湖南（5）、江西（6）等

地较为普遍,而在贵州尚未报道。结合形态学特征

和多基因分析结果鉴定该辣椒炭疽病的病原菌为尖

抱炭疽菌C. acutatum。本结果与杨佳文等匚刃在陕 西省线辣椒上首次发现的尖抱炭疽菌基本相同。尖 抱炭疽菌侵染后发病速度快，传染力强，且具有很强

的寄主组织专化性，能够危害草莓、苹果、辣椒、？果 等的果实（8）,对果实的品质和产量造成一定的

影响。采用菌丝生长速率法对8 种不同杀菌剂进行了

室内毒力测定。结果显示8种杀菌剂对辣椒炭疽病 菌均有一定的抑制作用。从EC50来看,30%毗唑醚

菌酯SC与25 %咪鲜胺EC对病菌菌丝生长的抑制

效果最好,EC50为0. 720 3和0. 253 5 mg/L,相关结 菌活性较好，而40%百菌清SC及20%噁霉•乙蒜

素WP的抑菌效果一般，与彭好翌（口用百菌清处理 辣椒尖抱炭疽菌和胶抱炭疽菌得出的结论一致，即

都没有表现出较高的抑制作用。毗唑醚菌酯是一种新近开发的农药，它能够抑 制抱子萌发,影响菌丝生长,而二氧蔥醌有很好的保

护活性和防治作用，目前这两种药剂混配只在防治 苹果炭疽病上使用过，且具有明显的防治效果, 而在辣椒炭疽病的防治上,还尚未见报道，故选择这

两种药剂混配来研究其对辣椒炭疽病菌菌丝生长的

抑制作用。试验结果表明30%毗唑醚菌酯SC和 22.7%二氧蔥醌SC按照4：6、6：4、9：1和3：7的比例

进行混配,ECe均明显低于两种单剂中的某一种单

剂菌具有较强的抑制作用，说明以这4种配比组合进行混配对辣椒炭疽病 %且共毒系数均大于120%具

有显著的增效作用。啶氧菌酯作为甲氧基丙烯酸酯

类杀菌剂，突变位点单一，长期使用易产生抗药

性（3），且还没有被广泛用于辣椒炭疽病的防治，因

此可以选择与其作用机理不同且没有交互抗性的甾 醇合成抑制剂杀菌剂咪鲜胺进行混配探究其对辣椒 炭疽病菌的抑制作用。试验结果表明25%咪鲜胺

EC和22. 5%啶氧菌酯SC以6：4、2：8和4： 6进行混

配时，其EQ均较小，且明显小于两种单剂的EQ，说

明以这三种配比组合进行混配均对辣椒炭疽病菌具

有较强的抑制作用。通过药剂间混配,不仅显著增强

了药剂对病菌菌丝生长的抑制作用,也有利于延缓病

菌抗药性的产生,延长药剂的使用寿命。由于田间环境影响因素多，室内筛选的药剂与

田间实际防效可能存在差异，对于药剂作用于病菌

抱子的情况也有待进一步试验。不同杀菌剂对不同

致病菌的毒力存在差异，有必要明确炭疽菌属的生 物学特性，从而为该病的防治奠定基础。目前，辣椒

炭疽病发生范围逐年扩大，且呈现病情加剧的趋势,

45 卷第4 期王妮等:辣椒炭疽病病原鉴定及其杀菌剂毒力测定• 223 •化学药剂防治只是综合防治中的一个环节，为实现

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农业可持续发展，避免因田间管理不当而造成病原 菌的再次流行和暴发,应结合农业防治措施,开展针 对辣椒炭疽病的抗病品种选育和无病种苗繁育工

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